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談?wù)勅~綠素的提取和分離方法

時(shí)間:2023-02-21 14:00:02   訪客:1929

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葉綠素提取的準(zhǔn)備工作在室溫為 25°C 的半暗室中進(jìn)行。提取步驟如下:
(1)取1000克新鮮綠葉,放入韋伯斯特?cái)嚢铏C(jī)中粉碎。
(2)將1000克壓碎的綠葉提取到加入少量碳酸鈣的丙酮(溫度20℃)中,直至過濾和洗滌的葉碎片無(wú)色。
(3) 將過濾后的丙酮提取液放入盛有1L石油醚和100mL丙酮的漏斗中,加入蒸餾水輕輕搖動(dòng)直至分層。棄去水層中的大部分丙酮和水溶性雜質(zhì),只剩下石油醚溶液。
(4)石油醚溶液再次用蒸餾水純化后,用含石油醚和0.01g草酸的200mL 80%甲醇溶液洗滌5次以上,最后得到黃綠色懸浮液。
(5)將懸浮液用無(wú)水硫酸鈉干燥,浸潤(rùn)于3cm厚的蔗糖粉制成的柱子中,然后用石油醚洗滌沉淀的色素,除去類胡蘿卜素,使其僅含天然葉綠素。
(6) 含有天然葉綠素的蔗糖柱分為兩層,綠色層有4-10mm的葉綠素b層,另一層藍(lán)色層有2-6mm的葉綠素a層。
(7) 將位于藍(lán)層中間的部分(約一半藍(lán)層)放入乙醚中,過濾懸浮液,洗脫,用蒸餾水洗滌,用硫酸鈉干燥,然后用容器過濾后,葉綠素得到一個(gè)。
(8)將(6)中綠色層中間部分去掉,迅速放入乙醚中過濾洗脫,制成葉綠素b乙醚溶液。
分離:
色譜法是分離、純化和鑒定有機(jī)化合物,尤其是痕量分析的重要方法。果蔬中的色素主要有脂溶性胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素和水溶性花青素。在提取實(shí)驗(yàn)中,我們可以利用相似混溶原理過濾掉水溶性花青素,然后利用薄層色譜、柱色譜、高效液相色譜分離胡蘿卜素、葉黃素和葉綠素。顏料的極性依次減弱,可適當(dāng)選擇單一有機(jī)溶劑或不同比例的混合溶劑作為展開溶劑和洗脫液,以確定最佳的優(yōu)化分離條件。


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